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ATCC細胞株穩定整合試驗中的幾個關鍵因素

更新時間:2019-02-27      點擊次數:2170
  ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物,也就是說,ATCC細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。
  ATCC細胞株穩定整合試驗中的幾個關鍵因素:
  1),外源插入片段的拷貝數。多數情況下,低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實驗因素的干擾。
  2),整合的幾率,這不僅決定了穩定株篩選的難易程度,而且還可以幫助人們更容易得到混合穩定株。
  3),整合位點的轉錄活躍度,決定了穩定株中外源片段的表達質量。理想的狀況是單拷貝,但轉錄活性比較高。
  4),整合后的穩定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩定性,有些區域易發生重組或者丟失,從而導致穩定株再次丟失的情況。
  5),使用混合穩定株或者獲得多個不同單克隆穩定株。因為穩定整合往往伴隨這插入失活宿主內源基因,所以實驗時通過使用混合穩定株,或者對多個單克隆穩定株進行比較,可以幫助研究人員獲得更的實驗數據。
  一個好的ATCC細胞株有多方面要求:
  1. 產量高,高的產量直接降低固定投資和單次生產成本。
  2. 產品質量符合要求。產品質量影響藥效和安全性。
  3. 穩定性。產量和質量在生產傳代過程中不應有大的改變。一般認為在60-90PDL產量變化不超過30%是可以接受的。
  4. 與生產過程的相容性。細胞株需要適合大規模生產放大。
  5. 合規。ATCC細胞株的構建過程應避免接觸或使用動物來源成分或其它可能影響安全性的成分, 保證單克隆性(clonality)以及整個過程的實驗記錄完整。
  凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后,可以立即解凍復蘇,去除二甲基亞砜(DSMO0)后進行細胞培養。如果不立即復蘇培養細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會立即下降。
  ATCC細胞株產品附帶一份產品資料單,其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到 ,產品資料單也可以在ATCC下載。此外產品還附帶細胞株具體生產批次的檢測報告,其中包含批次的特定信息,如每只凍存管中細胞的數量,無微生物污染的檢測結果等。
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