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黑色素瘤細(xì)胞株應(yīng)謹(jǐn)慎對待

更新時(shí)間:2015-07-26      點(diǎn)擊次數(shù):2091
   黑色素瘤細(xì)胞株是從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系或原代培養(yǎng)物用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,克隆具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的單細(xì)胞獲得的細(xì)胞群,稱細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。描述一個黑色素瘤細(xì)胞株時(shí),必須說明它的特殊性質(zhì)或標(biāo)志。與細(xì)胞系類似,如果不能繼續(xù)傳代或傳代代數(shù)有限,可稱為“有限細(xì)胞株(finitecellstrain)”。如果可以連續(xù)傳代,則可稱為“連續(xù)細(xì)胞株(continouscellstrain)”。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群,可稱為亞株(substrain)。克隆(clone)則為黑色素瘤細(xì)胞株的一種特殊情況,指由一個細(xì)胞增殖所形成的群體。
 
  黑色素瘤細(xì)胞株是實(shí)驗(yàn)中非常常用的一個細(xì)胞株,在生物制藥中使用也非常廣泛。該細(xì)胞株培養(yǎng)條件簡單,貼壁強(qiáng)度適中,比較容易轉(zhuǎn)染,很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。
 
  黑色素瘤細(xì)胞株對于更換培養(yǎng)基,應(yīng)謹(jǐn)慎對待,更換培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)留一瓶細(xì)胞使用推薦的培養(yǎng)基培養(yǎng),留作種子。更換培養(yǎng)基有兩種方法,zui簡單的方法是直接更換培養(yǎng)基,強(qiáng)制使細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)基;還有一種更溫和的方法:傳代細(xì)胞的時(shí)候分成細(xì)胞兩瓶,*瓶使用原來推薦的培養(yǎng)基,第二瓶使用50%原來推薦的培養(yǎng)基,50%新的培養(yǎng)基,之后仔細(xì)觀察黑色素瘤細(xì)胞株的生長狀態(tài),如果第二瓶細(xì)胞生長狀態(tài)不好,應(yīng)立即停止更換培養(yǎng)基,如果第二瓶生長狀態(tài)好,可以繼續(xù)傳代分瓶,一瓶使用50%原來推薦的培養(yǎng)基,50%新的培養(yǎng)基,另一瓶使用25%原來推薦的培養(yǎng)基,75%新的培養(yǎng)基,繼續(xù)觀察,如果細(xì)胞狀態(tài)好,可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。
 
  黑色素瘤細(xì)胞株在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細(xì)胞成單個黑色素瘤細(xì)胞株,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA是一種二價(jià)離子的螯合劑,能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03%(w/v)EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置,先用胰酶-EDTA消化液清洗細(xì)胞(5.0-10.0ml/75cm),然后棄去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA消化液(2.0to5.0ml/75sq.cmflask),觀察細(xì)胞直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要5-15分鐘,為了避免細(xì)胞成團(tuán),消化細(xì)胞的過程中不要拍打細(xì)胞瓶。對于特別難消化的黑色素瘤細(xì)胞株,可以加入胰酶EDTA消化液后把細(xì)胞置于37°C促進(jìn)消化,細(xì)胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化,血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下,離心并不需要。如果細(xì)胞需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基,可以以125000g轉(zhuǎn)速離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定,一般是1:2-1:20,具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些黑色素瘤細(xì)胞株的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷,對于這種類型的細(xì)胞,可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細(xì)胞,然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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